苦参碱逆转急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药的机制研究

【摘要】目的：进一步探讨苦参碱逆转急性早幼粒细胞白血病(APL)全反式维甲酸(ATRA)耐药的可能机制,明确端粒酶的活性调节及环腺苷酸(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)信号通路的相关调控在其中的作用。方法：以ATRA敏感的APL细胞系NB4及其ATRA耐药株NB4-R1作为研究对象。采用NBT还原实验检测1μmol/lATRA、0.1mmol/1苦参碱、1μmol/lATRA联合0.1mmol/l苦参碱对NB4及NB4-R1细胞的诱导分化能力；PCR-ELISA法检测各组端粒酶活性；流式细胞技术测定PKA拮抗剂H89作用前后各组细胞表面分化标记CD11b的表达；Westernblot,RT-PCI法检测H89作用前后各组PML/RARα、PLSCR1的蛋白及mRNA表达变化。结果：(1)ATRA单药或联合苦参碱均可显著上调NB4细胞的NBT阳性还原率(P<0.01),但两组间无差异(P>0.05),而NB4-R1细胞只有在联合用药时其NBT阳性还原率才明显上调(P<0.05)。(2)ATRA单药可明显下调NB4细胞的端粒酶活性(P<0.01),而对NB4-R1细胞无影响(P>0.05),其与苦参碱联用时对NB4(P<0.01)及NB4-R1细胞(P<0.05)的端粒酶活性均有显著抑制作用。(3)ATRA单药可促进NB4((P<0.01)及NB4-R1细胞(P<0.05)CD11b的表达,且联合苦参碱进一步上调NB4-R1细胞中的表达(P<0.01)。H89均可拮抗ATRA(NB4:P<0.01,NB4-R1:P<0.05)及联合苦参碱(NB4:P<0.01,NB4-R1:P<0.01)对CD11b的上调作用。(4)ATRA单药即可明显下调NB4细胞内PML/RARa并上调PLSCR1蛋白及mRNA的表达,而对于NB4-R1细胞,ATRA单药仅可部分下调PML/RARa并上调PLSCR1蛋白的表达,联合用药时才可显著抑制JPML/RARa并促进PLSCR1蛋白及mRNA的表达。(5)在蛋白及mRNA水平,H89均可拮抗NB4及NB4-R1细胞中ATRA单药及联合苦参碱对PML/RARa及PLSCR1的调节作用。结论：苦参碱可能协同ATRA抑制端粒酶的活性,并通过cAMP/PKA信号通路调节PML/RARa及PLSCR1的表达,从而发挥逆转急性早幼粒细胞白血病维甲酸耐药作用。
【作者】刘婷婷；
【导师】周郁鸿；
【作者基本信息】浙江中医药大学，中西医结合临床（专业学位），2014，硕士
【关键词】苦参碱；急性早幼粒细胞白血病；NB4；NB4-R1；H89；

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